滴露消毒液的杀菌效果与抑菌能力研究 KSYHPD

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提要滴露消毒液含对氯间二甲苯酚4.8%（g/ml）及表面活性剂、香料等。采用欧洲标准悬液试验方法测试其杀菌效果及*小抑菌浓度。结果，含滴露5%（ml/ml）的消毒液作用5min，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、海氏肠球菌及丨株临床分离菌株的杀灭可达到欧洲标准（杀灭指数为5.0）；但对绿脓杆菌的杀灭指数仅达3.8.滴露消毒液对临床分离菌株的*小抑菌浓度为含滴露<0.63%（ml/mU，*小杀菌浓度为大肠杆菌金黄色葡萄球菌海氏肠球菌0.85%（g/ml）氯化钠组成，用去离子水配制，调节pH为7.0±0.2，灭菌后使水处理反渗透设备用。

有机干扰物质为含牛血清白蛋白3%（ml/ml）的去离子水溶液，过滤灭菌后使用。

配制消毒剂用水为无菌标准硬水。

试验用消毒剂为滴露消毒液。试验时，用无菌标准硬水将其稀释至所需浓度的1.25倍（例如，测试100mg/L药物的效果，则需配制成125mg/L，因为试验中需加人有机千扰物质和试验用菌液）。

按照欧洲标准悬液试验方法进行。共进行两组试验：①中和试验组，取8ml中和剂，加1ml测试浓度消毒液，混匀5min，继续混匀。30min后，取lml接种平皿，加人18~20ml细菌培养基，摇匀。待冷却后，置（37*）°C温箱中培养48h，观察结果。②中和剂毒性对照组，与①组的区别为用无菌去离子水代替消毒剂，余者完全一致。对革兰阴性细菌，使用下列复方中和剂（复方1）：在1000ml中，含100ml马血含滴露绿脓杆菌滴露（Dettol）消毒液主要成分为对氯间二甲苯酚、表面活性剂、香料等。原液含对氯间二甲苯酚4.8%（g/ml）。有人已按照我国消毒技术规范对其实际消毒效果进行了观察，属中低效消毒剂。在此，我们按照欧洲标准悬液试验方法测试了其杀菌效果，并观察了其对抗生素耐药菌株及标准菌株的*小抑菌浓度。现将结果报告如下。

试验菌为大肠杆菌（ATCC海氏肠球菌（ATCC 10541）、绿脓杆菌（ATCC15442）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）及临床分离多重抗生素耐药菌株。将其37°C培养18~24h的新鲜斜面菌苔用细菌稀释液洗下，并稀释至所需浓度（108cfu/ml）备用。

豆蛋白胨。5%（g/ml）、氯化钠0，5%（g/ml）和琼脂1.5%（g/ml），用去离子水配制而成，调节pH为7.2±0.2，灭菌后使用。

*北京市疾病预防控制中心清、30ml吐温80、10ml磷酸盐缓冲液钠、lg组氨酸。对革兰阳性细菌，将上述复方中和剂中卵磷脂含量提高为lg，吐温80提高为100m丨，余者不变（复方2）。1.3悬液定量杀菌试验试验采用（20±1）°C水浴加温，于30ml无菌带盖大试管中进行。先用移液器配1ml无菌塑料吸头，分别加人1ml有机干扰物质、lml试验用菌液，电动振动器混匀35s，接着加入8ml测试浓度的消毒液，混匀并立即记时。至规定作用时间，取1ml混悬液加于9ml中和剂中，再次混匀。继续放于20°C水浴中作用10mm，取1ml接种平皿，或10倍系列稀释后接种平皿，加人1820m丨细菌培养基（10CTC融化后481：水浴保温），摇匀。待冷却后，置（37土1）°C温箱中培养48h，观察结果。

1.4MIC与MLC试验先配制普通肉汤和少量双倍浓度普通肉汤，按5ml/管分装于大试管内，灭菌后备用。试验时，用双倍浓度的肉汤，将药物对倍稀释，配制成所需的起始浓度。然后，取5ml加于一支含5ml普通肉汤的试管中，混匀；取混匀液5ml加于另一支含5ml普通肉汤的试管中，混匀；如此稀释至*低药物浓度。在上述每支试管中加人测试细菌的菌悬液（24h肉汤培养物）0.1ml，混匀。同时设阳性与阴性对照。放于37°C温箱中培养72h，观察结果。无菌生长的*低药物浓度，即为*小抑菌浓度（MIC）。

从无菌生长的3个*低药物稀释度的肉汤管中，用接种环取出一环，无菌操作划线于普通琼脂培养基表面，于37°C培养24h，观察仍无菌生长的*低药物浓度为*低杀菌浓经测试，所选两种复方中和剂，可有效中和含滴露5%（ml/ml）的溶液对革兰阴性与阳性细菌的残留杀菌作用，两组平均菌数差别不足10%（表1），达到了欧洲标准（容许差别为50%以内）的要求。

微生物中和剂类型Type试验组Test平均菌数复方I中和试验毒性对照金黄色葡萄球菌复方n中和试验毒性对照注：试验温度划20±I）°C.以含滴露5%（ml/ml）的稀释液与中和剂作用5 min.结果为3次试验平均值。

2.2杀菌效果ml）的消毒液，即可达到消毒的合格水平；结果表明，对金黄色葡萄球菌、海氏肠而对绿脓杆菌，消毒液含滴露球菌、大肠杆菌，使用含滴露2.5%（ml/ 10%（ml/ml）的杀灭指数为4.67，仍未达到合格要求（表2）。因绿脓杆菌是医院环境中的主要污染微生物之一，也是引起医院交叉感染的主要微生物，所以进行滴露对临床实际分离微生物的杀灭试验验证。

表2滴露对标准消毒测试菌株的杀灭效果（EN1276）注：试验温度为（20±1）°C.消毒液对微生物作用5结果为3次试验平均值。

使用欧洲标准悬液试验法（EN1276），对10株临床分离菌株（部分菌株对临床使用的广谱抗生素产生耐药性）进行测试。结果发现，含滴露2.5%~5.0%（ml/ml）的消毒液，作用5min可以杀灭所试各菌株（表水处理设备3）。

测定滴露消毒液对10株临床分离菌株MIC与MLC的大小有一定差别，但滴露浓度均低于推荐使用的浓度（2.5%，即1：40），而且MIC比MLC更低（表4）。

滴露消毒液属酚类消毒剂，应用于医院消毒始于1920年前后，并使当时产妇生表3滴露对临床分离菌株的杀灭效果（EN作用后的杀灭指数耐甲氧k林金黄色葡蚓eth丨sp.53724克雷伯氏菌属61463注：试验温度为（20±）t消毒液对微生物作用5 min6结果为3次试验平均值。

产后各种发热、感染的发生率减少50%以上。此后，在西方国家广泛应用于医院消毒。环境消毒、病家消毒等方面。1995年前后引人我国。

林锦炎等n5按照我国消毒技术规范，对其杀菌能力进行测试，用含滴露0.25%（1：400）的消毒液作用10min，即达我国消毒合格标准。该结果明显优于国外的报道其原因可能是多方面的，其中试验方法的不一致与判断标准的篼低可能是决定性因素。

表4滴露对临床分离菌株的*小抑菌浓度与*小杀菌浓度耐甲氧西林金黄色葡萄球菌15Methicillin-resistant注：试验经5次重复。

我们按照欧洲标准试验方法进行测试，含滴露5%（ml/ml）的消毒液作用5min，对金黄色葡萄球菌（ATCC6538）。大肠杆菌（ATCC丨0536）、海氏肠球菌（ATCC10541）等标准菌株及10株临床分离菌株的杀灭率达到了欧洲标准99.999%（杀灭指数为5.0）的要求；但对绿脓杆菌（ATCC15442）标准株的杀灭能力较弱，含滴露10°/.（1丨/111丨）的消毒液作用5111丨11，杀灭指数仅为4.67，仍未达到合格要求。消毒剂*小抑菌浓度与*小杀菌浓度，是反应消毒剂作用大小的重要指标之一。滴露消毒液对临床分离菌株（部分菌株对广谱抗生素产生耐药性）的*小抑菌浓度与*小杀菌浓度，明显低于推荐的消毒应用浓度（2.5%），而且MIC比MLC更低。其中，*低的*小杀菌浓度为0.31%（1：320），仍篼于林锦炎等报告的浓度U：400）。为此，我们认为，我国消毒技术规范的标准偏低，试验体系亦有待进行必要的修订。

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